对于大多数以碳酸盐作为pH缓冲体系的培养液，为了维持稳定的pH，培养箱中的二氧化碳需要维持在2-10%之间，以维持培养液中溶解的二氧化碳浓度。同时，用于细胞培养的容器需要一定程度的通风，以便于气体的交换。

细胞培养基中常加入其他pH缓冲体系，如HEPES缓冲体系，以增加pH缓冲容量。HEPES在pH7.2-7.4有很强的缓冲能力。当可呼吸的培养容器从二氧化碳培养箱中取出时，培养液中的碳酸盐缓冲体系会因为空气中二氧化碳浓度低而失去作用。此时HEPES的缓冲体系可以保持pH稳定。

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