保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在恒温恒湿培养箱中25℃(或较高温度)下培养5～7天(或较长时间)。恒温恒湿培养箱所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子，对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基。将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。

一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。放线菌孢子的培养基大多是采用豌豆浸出液、牛肉膏及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28～37℃恒温恒湿培养箱培养5～14天。

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