优选适宜复方丹参片干燥方法的研究

［摘 要］为优选适宜复方丹参片的干燥方法，探索微波真空干燥、真空干燥和烘箱干燥３种干燥工艺对丹参提取液的影响，采用 ＵＰＬＣ 法测定不同干燥方法的丹参提取液的 ＵＰＬＣ 特征图谱及指标性成分含量。结果表明：迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ 浓度分别在０.００７～０.０２６ ｍｇ／ｍＬ，０.１３０～０.４４０ ｍｇ／ｍＬ，０.００２～０.００９ ｍｇ／ｍＬ，０.００３～０.０１５ ｍｇ／ｍＬ 的线性关系良好（ｒ≥０.９９９１）.平均回收率分别为９９.３０％（ＲＳＤ＝０.６２％），９６.４１％（ＲＳＤ＝０.４７％），１００.５８％（ＲＳＤ＝１.２３％），１０２.８４％（ＲＳＤ＝１.０２％）。微波真空干燥、真空干燥和烘箱干燥后的指标性成分总含量分别为６４.７８０ ５ ｍｇ／ｇ、６４.５０１７ ｍｇ／ｇ和５８.９９００ ｍｇ／ｇ。３种干燥方法的 ＵＰＬＣ 特征图谱相似度达０.９９７以上。综合考虑微波真空干燥明显优于其他干燥方法。干燥是中药制剂生产中的重要工艺，不同的干燥方法及干燥温度可以使制剂的内在质量发生改变，进而影响临床疗效。复方丹参片为药典收载的品种被长期广泛用于气滞血瘀所致的胸痹、胸闷、心前区刺痛、冠心病、心绞痛等症［１］。丹参在处方中为主药，具有祛瘀止痛、活血化瘀、养心除烦的功效，主要活性成分有水溶性酚酸类化合物及脂溶性的丹参酮类化合物。真空干燥、烘箱干燥是中成药生产中被广泛使用的干燥方法，主要采用空气对流加热，但传热效率慢，干燥所需时间长，易出现表面假干燥现象且在干燥过程中易造成多酚酸类、丹参酮ⅡＡ 等热敏性成分的损失。微波真空干燥是通过微波辐射、传热方式与真空技术相结合的新型干燥技术，它可 使物料在低温条件下完成干燥且传热效率高、干燥 时间短，不易出现表面假干燥和结壳现象，可有效保 证质量品质。超高效液相色谱（ＵＰＬＣ）是一种新型液相色谱技术，具有超高灵敏度、超强分离能力和速度等优点，与 ＨＰＬＣ指纹图谱相比，ＵＰＬＣ指纹图谱可大大缩短分析时间，且色谱峰分离更好，灵敏度 也更高，有效的提高了分析效率。目前文献报道，丹 参提取液的干燥方式的选择主要集中在常压干燥、真空减压干燥、喷雾干燥等方面，且评价指标通常是 采用 ＨＰＬＣ 测定丹酚酸 Ｂ、丹参酮ⅡＡ 的含量，而通过 ＵＰＬＣ 特征图谱比较不同干燥工艺并对其中的多个指标性成分进行定量的研究尚未多见［６－９］。因此，试验采用 ＵＰＬＣ 技术，对复方丹参片中丹参的水溶性成分和脂溶性成分进行研究，建立同一流 动相条件下同时检测多个成分的复方丹参片特征图谱。从特征图谱、指标性成分含量、干燥时间、含水 量、干膏性状、干膏量、干膏收率及能耗方面对３ 种干燥方法进行综合比较，为复方丹参片大生产中的干燥工艺优化提供参考。

１  材料与方法１.１  试验材料药材及药品：丹参药材均购于贵阳同济堂（批号２０１３０９２８，产地山东），经鉴定为中国药典品种；丹参酮ⅡＡ（批 号 ５６８－７２－９），迷 迭香酸 （批 号 ２０２８３－９２－５），丹酚酸Ｂ（批号１１５９３９－２５－８）均购于成都瑞芬思生物科技有限公司，纯度≥９８％，隐丹参酮（批号８５２－９９０３中国药品生物制品检定所），供含量测定用；甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），甲酸（色谱纯），屈臣氏蒸馏水。其他试剂均为分析纯。仪器：ＷＢＺ－２ 型微波真空干燥机（功率２ＫＷ， 贵阳新奇微波工业有限责任公司），真空干燥箱（型号ＤＺＦ－６２１０加热功率２ｋｗ，上海齐欣科学仪器有限公司），远红外鼓风快速干燥箱（型号ＹＨＧ－５００－ＢＳ－ＩＩ加热功率２ｋｗ，上海费德试验设备有限公司），超声波清洗器（型号ＳＫ８２１０ＨＰ，上海科导超声仪器有限公司），超 高效液相色谱仪 （型 号 ＷａｔｅｓＵＰＬＣ，沃特斯中国有限公司）。１.２  丹参提取液的制备称取丹参药材４００ｇ，加入１０ 倍量的９５％ 乙醇回流１.５ｈ，滤液回收乙醇并减压浓缩至适量；药渣加１０倍量５０％乙醇回流1.５ｈ，滤液回收乙醇并浓缩至适量；药渣加１０倍量的水煎煮２ｈ，滤液浓缩至适量；合并滤液，浓缩至相对密度为１.１１左右的清膏，将清膏分为８份，备用。１.３  干燥方法１.３.１  烘箱干燥  称取丹参清膏１０２ｇ，平行制备２份，分别置于５００ｍＬ蒸发皿中，置于远红外鼓风快速干燥箱中，温度设定为６０℃，干燥后称定干膏重量，并测定含水量。１.３.２  真空干燥  称取丹参清膏１０２ｇ，平行制备２份，分别置于５００ｍＬ蒸发皿中，置真空干燥箱内，温度设定为６０℃，真空度为－０.０７ ＭＰａ，干燥后称定干膏重量，并测定含水量。１.３.３  微波真空干燥  称取丹参清膏１０２ｇ，置于微波专用物料盒内，在微波真空干燥箱中干燥，干燥过程为功率１和功率２ 交替变化的加热方式，功率１微波１５ｍｉｎ左右，功率２微波２０ｍｉｎ左右，温度控制在１７～４０℃，真空度为－０.０７ ＭＰａ，干燥后称定干膏重量，并测定含水量。１.４  ＵＰＬＣ特征图谱的建立１.４.１   色谱条件   色 谱 柱：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＳｈｉｅｌｄＲＰ１８１.７μｍ２.１×５０ｍｍ Ｃｏｌｕｍｎ；流动相：０.５％ 甲酸水（Ａ）－乙腈（Ｂ）梯度洗脱，柱温：３０℃，流速：０.２ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长：２７０ｎｍ，进样量２μＬ。 理论板数按丹参酮ⅡＡ 峰计算应不低于２０００。梯度洗脱条件：０～１０ ｍｉｎ，１０％ ～２７.５％ Ｂ；１０～１５ ｍｉｎ，２７.５％ ～３２％ Ｂ；１５～３５ ｍｉｎ， ３２％～５０％ Ｂ。１.４.２  对照品溶液的配制   精密称取迷迭香酸６.４６ ｍｇ、丹酚酸 Ｂ２１.８２ ｍｇ、隐丹参酮２.７０ ｍｇ、丹参酮ⅡＡ４.６９ ｍｇ，置于２５ ｍＬ 量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，制得浓度分别为０.２５８４ ｍｇ／ｍＬ、０.８７２８ｍｇ／ｍＬ、０.１０８０ｍｇ／ｍＬ、０.１８７６ｍｇ／ｍＬ 对照品储备液。１.４.３  供试品溶液的制备  精密称取丹参干燥浸膏粉０.１ ｇ，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇２５ｍＬ，密塞，称定质量，超声提取１５ｍｉｎ，放冷，再称定，用甲醇补足失重，摇匀，过滤，取续滤液，即得。１.５  方法学考察１）线性回归。分别精密吸取迷迭香酸储备液、丹酚酸Ｂ 储备液、隐丹参酮储备液、丹参酮ⅡＡ 储备液配成６个不同浓度的混合对照品溶液（混合对照品溶液中迷迭香酸的浓度分别为７.７５ μｇ／ｍＬ、１０.３４μｇ／ ｍＬ、１５.５０ μｇ／ｍＬ、１８.６０ μｇ／ｍＬ、２０.６７μｇ／ｍＬ、２５.８４μｇ／ｍＬ，丹酚酸 Ｂ 的浓度分别为 １１３.０９ μｇ／ｍＬ、１７.４５ μｇ／ｍＬ、２６.１８ μｇ／ｍＬ、３１.４２μｇ／ｍＬ、３４.９１μｇ／ｍＬ、４３.６４μｇ／ｍＬ，隐丹参 酮 的 浓 度 分 别 为 ２.１６ μｇ／ｍＬ、３.２４ μｇ／ｍＬ、 ４.３２μｇ／ ｍＬ、５.１８ μｇ／ｍＬ、６．４８ μｇ／ｍＬ、８.１０μｇ／ｍＬ，丹 参酮ⅡＡ的浓度分别为 ３.７５ μｇ／ｍＬ、５.６３μｇ／ｍＬ、７.５０μｇ／ｍＬ、９.００μｇ／ｍＬ、１１.２６μｇ／ｍＬ、１４.０７μｇ／ｍＬ）注入 ＵＰＬＣ 测定，以进样浓度（ｘ，ｍｇ／ｍＬ）为横坐标，峰面积（Ａ）为纵坐标，计算线性回归。２）精密度试验。取供试品溶液，按上述相应的色谱条件连续进样６ 次，检测特征峰。记录迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ色谱峰的保留时间及峰面积，以丹酚酸为参照峰，计算相对保留时间、相对峰面积、各成分峰面积ＲＳＤ（ｎ＝６）。３）稳定性试验。取供试品溶液，分别于 ０ｈ、２ｈ、４ｈ、８ｈ、１６ｈ、２４ｈ测定。记录迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ 色谱峰的保留时间及峰面积，计算相对保留时间、相对峰面积、各成分峰面积ＲＳＤ（ｎ＝６）。４）重复性试验。取同一干燥方法下的样品，按１.４.３制备供试品溶液，共６份，分别取样测定。记录迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ 色谱峰的保留时间及峰面积，计算相对保留时间、相对峰面积、各成分含量ＲＳＤ（ｎ＝６）。５）加样回收。精密称取６ 份已知含量的样品０.０５ｇ，按照１００％样品含量分别加入混合对照品溶液，按１.３.３制备供试品溶液，１.４.１色谱条件进样测定，考察４个指标性成分的平均回收率（ｎ＝６）。１.６   不同干燥方法的特征图谱测定精密吸取各干燥法的供试品溶液和参照物溶液２μＬ，注入 ＵＰＬＣ，按照１．４．１色谱条件测定，记录色谱图。

２  结果与分析２.１   不同干燥工艺对评价指标的影响由表１可知，微波真空干燥的干燥时间短，仅需４０ｍｉｎ左右，且得到的干膏疏松多孔、含水量低；而常压干燥与减压真空干燥的干燥时间需５ｄ左右， 干膏的硬度较大；显然微波干燥大大缩短了时间，在工业化生产中可以提高工作效率，具有明显的优势。２.２  ＵＰＬＣ特征图谱的方法学考察２.２.１  线性关系  迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ 的线性回归方程分别为：ｙ＝１０７ｘ－５４３４.６（Ｒ＝０.９９９１），ｙ＝１０７ｘ－２５９５４２（Ｒ＝０.９９９５），ｙ＝３× １０７ｘ－６０６４.２（Ｒ＝０.９９９１），ｙ＝５×１０７ｘ－４６５９.８（Ｒ＝０.９９９１）；迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ浓度分别在０.００７～０.０２６ ｍｇ／ｍＬ，０.１３０～０.４４０ ｍｇ／ｍＬ，０.００２～０．００９ｍｇ／ｍＬ，０.００３～０.０１５ｍｇ／ｍＬ与其色谱峰面积成良好的线性关系。

２.２.２   精密度试验显示，迷迭香酸、丹酚酸 Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ峰面积的ＲＳＤ 分别为０.６５％、０.７０％、１.１１％和０.９２％，且４种成分的相对保留时间ＲＳＤ均小于２.１０％，相对峰面积 ＲＳＤ均小于１.４１％，表明仪器精密度良好。２.２.３   稳定性迷迭香酸、丹酚酸 Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ峰面积的 ＲＳＤ 分别为０.８７％、１.０７％、２.０９％、１.４９％，４种成分在６个不同时刻的相对保留时间ＲＳＤ均小于０.０５％，相对峰面积ＲＳＤ均小于３.００％，表明４种成分在２４ｈ内稳定。２.２.４  重复性  试验表明，６份供试品溶液中４种成分含量结果 ＲＳＤ均小于１.０１％，相对保留时间ＲＳＤ均 小 于 ０.１０％，相 对 峰 面 积 ＲＳＤ均 小 于１.７５％，说明此方法的重复性良好。２.２.５  加样回收试验表明，常规干燥条件下的丹参提取物样品中迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ 的平均回收分别为９９.３０（ＲＳＤ ＝０.６２％），９６.４１（ＲＳＤ＝０.４７％），１００.５８（ＲＳＤ＝１.２３％），１０２.８４（ＲＳＤ＝１.０２％），各项 ＲＳＤ值均小于３.０％。说明，此方法能够准确测定该样品中的４种指标性成分含量。２.３  不同干燥方法的特征图谱测定由图示可知，各干燥工艺下的丹参提取物主要化学成分类型基本无差异，主要是各组分在含量上的差别。采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统（２００４年 Ａ版）对３种干燥工艺的图谱进行相似度计算，相似度达０．９９７以上。

２.４  指标性成分的含量对比通过数据比较分析（表２），微波真空干燥和减压真空干燥两种干燥方式对水溶性的酚酸类及脂溶性的丹参酮类含量影响不大；而烘箱干燥则明显的使丹酚酸Ｂ 和丹参酮ⅡＡ的含量大大降低。烘箱干燥的干燥时间长，加热温度高，浸膏表面易硬化结壳不利于浸膏内部水分蒸发，特别容易造成酚酸类成分、丹参酮ⅡＡ 等热敏性成分的损失。微波真空干燥，在干燥过程中温度梯度、传热和蒸汽压迁移方向均一致，具有干燥温度低、干燥速度快、受热均匀、效率高等优点，可有效保证有效成分的含量。因此使得微波真空干燥后的指标性成分总含量明显高于常压的烘箱干燥。３ 结论与讨论通过试验，建立了丹参提取物中迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ同时测定的方法。确定以乙腈（Ｂ）－０.５％甲酸水（Ａ）溶液为流动相进行梯度洗脱（０～１０ ｍｉｎ，１０％ ～２７.５％ Ｂ；１０～１５ ｍｉｎ， ２７.５％～３２％ Ｂ；１５～３５ ｍｉｎ，３２％ ～５０％ Ｂ），选择在２７０ｎｍ出峰较多，各组分都有较好吸收的波长作为检测波长。采用甲醇为提取溶剂、超声提取方 法作为供试品的制备方法。特征图谱技术是一种可以综合评价复杂多组分化学成分样品的质量控制方法。试验以迷迭香酸、丹酚酸Ｂ、隐丹参酮、丹参酮ⅡＡ 为特征峰对不同干燥工艺的丹参提取物进行特征图谱研究，可看出各 干燥方法的丹参提取物的化学成分无差异，主要是 各组分在含量上的差别。通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统对精密度、稳定性、重复性试验的相似度进行计算，结果表明，试验建立的特征图谱稳定性和可控性良好。试验中真空干燥、烘箱干燥、微波真空干燥的时间分别为１１５ｈ，１２６ｈ，０.６２ｈ，前两种干燥方法的干燥时间分别是微波真空干燥的１８５倍和２０３倍。微波真空干燥的总耗电量为０.２５ｋｗ／ｈ，而真空干燥和烘箱干燥的总耗电量分别是 ２３０ｋｗ／ｈ 和２５２ｋｗ／ｈ，因此真空干燥和烘箱干燥在总耗电量方面是微波真空干燥的近１０００倍。微波真空干燥得到的干膏性状疏松多孔，易碎成细粉，且表面大，比 烘箱干燥得到的粉体更易吸潮，应及时密封保存。在微波干燥过程中，由于温度梯度、传热和蒸汽压迁移方向均一致，因此干燥时间短、加热温度低，使干膏中有效成分损失小。真空干燥虽然干燥温度较低，但传热速度慢，干燥的时间长。烘箱干燥的时间长，温度高，使干膏中的有效成分损失最大。综合考虑，３种干燥工艺对指标性成分含量、干燥时间、含水量、干膏性状、干膏量、干膏收率及能耗的影响，微波真空干燥明显优于其他两种干燥方法。因此，微波真空干燥是一种有效、实用、有前景的新型干燥技术，非常适合于中成药生产，可以有效为复方丹参片大生产中的干燥工艺优化提供参考，在工业化生产中具有较大的应用价值。

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