Western Blot（WB）实验需要购买的试剂和耗材可分为以下几类，按实验步骤（样品制备、电泳、转膜、封闭、抗体孵育、检测）整理如下：

一、试剂

1. 样品制备

• 裂解缓冲液：

  • RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂）

  • NP-40或Triton X-100（温和裂解）

• 蛋白酶/磷酸酶抑制剂：PMSF、Cocktail抑制剂

• 蛋白定量试剂：

  • BCA法（BCA试剂盒）

  • Bradford法（考马斯亮蓝试剂）

• 上样缓冲液：

  • Laemmli Buffer（含SDS、β-巯基乙醇或DTT）

• 还原剂：DTT（二硫苏糖醇）或β-巯基乙醇

2. 电泳（SDS-PAGE）

• 凝胶制备试剂：

  • 30%丙烯酰胺/双丙烯酰胺（Acr/Bis）

  • SDS（十二烷基硫酸钠）

  • TEMED（四甲基乙二胺）

  • 过硫酸铵（APS）

• 电泳缓冲液：Tris-Glycine-SDS缓冲液

3. 转膜（湿转/半干转）

• 转膜缓冲液：

  • Tris-Glycine缓冲液（湿转）

  • Tris-Glycine-SDS缓冲液（半干转需加甲醇）

• 甲醇（PVDF膜活化用）

4. 封闭与抗体孵育

• 封闭剂：

  • 5%脱脂牛奶（TBST或PBS配制）

  • BSA（牛血清白蛋白，适用于磷酸化蛋白）

• 洗涤缓冲液：TBST（Tris-HCl + Tween-20）或PBST

• 一抗：目标蛋白特异性抗体（如Anti-β-actin、Anti-GAPDH等内参抗体）

• 二抗：

  • HRP（辣根过氧化物酶）或荧光标记的二抗（如Goat Anti-Rabbit IgG-HRP）

5. 检测

• 化学发光（ECL）试剂：

  • 超敏ECL底物（如Pierce™ ECL Plus）

• 荧光检测试剂（若使用荧光二抗）：

  • 近红外荧光染料（如IRDye）

二、耗材

1. 样品处理

• EP管（1.5 mL、0.5 mL）

• 离心管（15 mL、50 mL）

• 细胞刮刀或匀浆器（组织样品）

2. 电泳

• 电泳槽（垂直电泳系统）

• 玻璃板/垫片（制胶用）

• 梳子（10/12/15齿，用于制胶加样孔）

• 上样枪头（细长Tip，避免样品溢出）

3. 转膜

• 转膜夹/三明治结构（滤纸+凝胶+膜）

• 滤纸（厚滤纸，尺寸匹配凝胶）

• 膜：

  • PVDF膜（需甲醇活化）

  • 硝酸纤维素膜（NC膜，无需活化）

• 转膜装置（湿转槽或半干转仪）

4. 抗体孵育与检测

• 摇床（抗体孵育时使用）

• 显影盒/暗盒（化学发光成像）

• X光片（传统检测）或化学发光成像仪（数字成像）

5. 其他耗材

• 冰盒（样品低温操作）

• 制胶架/灌胶器

• 镊子（取膜用，避免手直接接触）

• 计时器/磁力搅拌器

三、可选试剂/耗材（根据实验需求）

• 预染蛋白Marker（观察电泳进程）

• 脱色摇床（考马斯亮蓝染色后脱色）

• Strip缓冲液（抗体剥离后重复孵育）

• 无尘纸（擦拭膜表面）

注意事项

1. 抗体选择：一抗需验证特异性（推荐引用文献或数据库如CiteAb）；二抗需匹配一抗种属（如兔源一抗搭配抗兔二抗）。

2. 膜的选择：

   • PVDF膜：结合能力强，适合低丰度蛋白，需甲醇活化。

   • NC膜：亲水性好，但易碎，适合高丰度蛋白。

3. ECL试剂：超敏底物可检测低表达蛋白，但信号持续时间短，需及时成像。

建议根据实验具体目标（如磷酸化蛋白检测需高纯度BSA封闭）调整试剂清单。

“如果你还有任何关于试剂耗材需求的问题，欢迎联系集思仪器，免费咨询热线：400-0027-510 ”）