色谱柱的清洗

正相色谱柱

1. 用四氢呋喃冲洗

2. 用甲醇冲洗

3. 用四氢呋喃冲洗

4. 用二氯甲烷冲洗

5. 用无苯正己烷冲洗

反相色谱柱

1. 用 HPLC 级水冲洗，在冲洗过程中注入4等分共 200μL 的 DMSO

2. 用甲醇冲洗

3. 用氯仿冲洗

4. 用甲醇冲洗

阴离子交换色谱柱

1. 用 HPLC 级水冲洗

2. 用 50mM 到 1M 的适当缓冲液进行梯度冲洗

3. 用 HPLC 级水冲洗

4. 用甲醇冲洗

5. 用氯仿冲洗

阳离子交换色谱柱

1. 用HPLC级水冲洗，在冲洗过程中注入 4 等分共 200μL 的 DMSO

2. 用四氢呋喃冲洗

蛋白体积排阻色谱柱

从蛋白体积排阻填料中移除污染物有两种清洗/再生方法

弱保留蛋白

1. 用30mL 0.1M 磷酸盐缓冲液 (pH 3.0) 冲洗

强保留蛋白

2. 用 100% 水到 100% 乙腈梯度冲洗60分钟

多孔石墨碳色谱柱

多孔石墨碳有四种清洗或再生方法。使用哪种方法取决于分析物以及对应的流动相

1.酸/碱清洗：用水相比例较高的流动相分析离子化合物时

1.1 反接色谱柱

1.2 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氢呋喃:水 (1:1) 溶液冲洗

1.3 用 50mL 包含 0.1% 三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃:水 (1:1) 冲洗

1.4 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氢呋喃:水 (1:1) 溶液冲洗

1.5 用 70 倍柱体积的 THF 冲洗

1.6 用甲醇/水 (95:5) 冲洗以重新平衡

1.7 重新倒转色谱柱方向

2.强有机溶剂清洗

用水相比例较高的流动相分析极性和/或离子化化合物时

2.1 用 50mL 丙酮冲洗

2.2 用 120mL 二丁醚冲洗

2.3 用 50mL 丙酮冲洗

2.4 用水溶液流动相冲洗直到达到平衡

3．正相模式的清洗

适用于使用正相流动相进行分析的应用。

3.1 用 50mL 二氯甲烷冲洗

3.2 用 50mL 甲醇冲洗

3.3 用 50mL 水冲洗

3.4 用 50mL 0.1M 盐酸冲洗

3.5 用 50mL 水冲洗

3.6 用 50mL 甲醇冲洗

3.7 用 50mL 二氯甲烷冲洗

3.8 用流动相冲洗直到达到平衡

4. 移除 TFA 和 DEA

TFA 和DEA可能吸附于多孔石墨碳表面；在流动相中使用这些添加剂后，应对色谱柱进行再生以确保始终实现 Hypercarb的原始选择性和最佳性能。

再生程序如下：

4.1 移除 TFA：用 70 倍柱体积的 THF 冲洗。

4.2 移除 DEA：将柱温设为75℃，然后用120倍柱体积的ACN 冲洗。

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