一、 HPLC试剂要求

甲醇，乙腈必须为色谱级纯及以上级别，其他试剂也尽量使用色谱级纯，试剂标签上都会标有HPLC字样。水为超纯水或者购买商品化的的纯净水例如屈臣氏。

二、流动相配制注意事项

一般来说，溶剂的混合通常按体积比（V/V）。

体积混合有三种方式，例如95%乙腈水溶液：

方式1：可以用量筒量取乙腈950ml，再量取水50ml，两种液体在瓶内充分摇晃混合。

方式2：可以先取950ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

方式3：可以先取50ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

这三种方式配置得到的流动相组成都是不同的，即使不考虑其他方面因素，保留时间也不会相同。一般情况推荐使用方式1 来配置流动相。

一、 HPLC试剂要求

甲醇，乙腈必须为色谱级纯及以上级别，其他试剂也尽量使用色谱级纯，试剂标签上都会标有HPLC字样。水为超纯水或者购买商品化的的纯净水例如屈臣氏。

二、流动相配制注意事项

一般来说，溶剂的混合通常按体积比（V/V）。

体积混合有三种方式，例如95%乙腈水溶液：

方式1：可以用量筒量取乙腈950ml，再量取水50ml，两种液体在瓶内充分摇晃混合。

方式2：可以先取950ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

方式3：可以先取50ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

这三种方式配置得到的流动相组成都是不同的，即使不考虑其他方面因素，保留时间也不会相同。一般情况推荐使用方式1 来配置流动相。

三、含缓冲盐流动相的配制需注意的事项

配制缓冲盐所使用的盐试剂需为色谱纯，称样需选择量程适宜的天平且每天使用前对天平校正。流动相需过0.45μm或0.22μm滤膜过滤并超声脱气20min以上。若配有在线脱气机可适当减少脱气时间。

注意：不得将装流动相的容器直接放置与超声仪内（容易破碎），需放与筛网上进行超声。

四、调节流动相pH值

采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，调节流动相的pH值的目的是为抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善样品的峰形。

（1）对于弱酸样品，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液。

（2）对于弱碱样品，情况相反。分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）也被称为除尾剂或者减尾剂。

五、流动相的使用注意事项

1）所用流动相必须预先滤过和脱气，流动相一般贮存于玻璃容器内。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化；

2）磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量现配现用，不要长期贮存；

3）容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物；

武汉集思仪器设备有限公司致力于打造世界先进水平又适合国内的实验室设备，致力于为您度身定制系统的实验室整体解决方案，是华中地区规模型实验室服务一站式供应商，已为超过5000个国内知名企事业单位提供专业实验室仪器设备，咨询热线：027-85518521，400-0027-510，17720504339。